全基因合成常見問題（一）

Q1. 化學合成基因的方法有哪些？

    (1) 全基因合成：一般對于分子較小而又不易得到的基因采用該方式?？蓪㈦p鏈基因分成若干寡核苷酸單鏈片段(尤其待合成基因在100個核苷酸以上時)，每個片段長度控制在40～60個堿基，并使每對相鄰互補的片段之間有大于6bp交叉重疊。在體外將所有對應的片段混合經PCR反應即可拼接得到較長的基因片段。采用分步連接、亞克隆的方法時，最后將亞克隆的較大片段重組為完整的基因。為便于亞克隆中回收基因片段，應在片段兩側設計合適的酶切位點；由于每個亞克隆可以分別鑒定，從而可減少順序錯誤的可能性。

    (2) 酶促合成：此法又稱基因的半合成法。全基因合成，特別是較大的基因的全部化學合成成本昂貴，使用半合成的方法可以降低成本，從而利于普及使用。首先合成末端之間有10～14個互補堿基的寡核苷酸片段，退火后以重疊區作為引物，在4種dNTP存在的條件下，通過DNA聚合酶或反轉錄酶的作用，獲得兩條完整的互補雙鏈。合成基因的結構應包括有克隆和表達所需要的全部信號及DNA順序，基因密碼子的閱讀框架也應該同表達體系相適應。此外，由于不同物種的密碼子使用偏好性，在基因合成和克隆時必須考慮這個問題?？赏ㄟ^密碼子優化獲得高效表達。

Q2. 為什么要進行全基因合成？

    最常見的獲得目的基因的方法是PCR 擴增釣取基因。但很多的時候，擴增只會得到痕量或根本就得不到目的基因。如果用這種方法，首先，必須準備某一特定組織的cDNA文庫，就必須花時間去準備或訂購。其次，目的基因在文庫中的含量必須充足，否則就可能會找不到合適的方法釣取或克隆得到。第三，PCR擴增得到的目的基因可能會含有許多點突變或單核苷酸多態性，這會給您后期的實驗應用帶來極大麻煩。

    擁有國內從事基因合成最早的、經驗最豐富的專家團隊，捷瑞公司可以在第一時間提供給您100％正確的目的基因，比PCR釣取法更快更準確，甚至更節約經費。

Q3. 全基因合成一般服務流程是怎樣的?

    (1) 客戶提供您所需要合成的基因序列信息，可從捷瑞公司網站（www.songtaowang.com）下載全基因合成訂單，務必詳細填寫；

    (2) 本公司首先將對客戶提供的基因全序列進行軟件分析，檢查基因內部是否含有重復序列及特殊結構，根據序列具體情況設計基因合成方案，并及時回信確認合成信息；

    (3) 在得到客戶認可后簽訂基因合成協議，要求客戶支付合成總費用的50％作為預付款；

    (4) 本公司收到預付款后立即安排生產，進行引物合成、DNA片段拼接等工作，將全長基因克隆于載體中，通過DNA測序確認合成基因的正確性；對錯誤位點用定點突變方法進行修復，最后得到與客戶提供序列完全一致的基因；

    (5) 基因合成結束，通知客戶支付剩余的50％合成款項；

    (6) 待客戶付余款之后及時給客戶發貨。

Q4. 在捷瑞公司合成的基因有長度限制嗎？

    捷瑞公司可以合成任何長度的基因。

Q5. 密碼子優化有必要嗎？

    有必要。不同來源的種屬密碼子的偏好性不同。比如，在人體內受偏愛的密碼子對于E. coli來說可能是稀有的。捷瑞公司已經為國內外客戶優化了大量的基因，有自主研發的專業軟件?？擅赓M為客戶提供密碼子優化服務。

Q6. 捷瑞公司的標準免費克隆載體是什么？

    (1) pUC系列（pUC18/pUC19/pUC57），pBluescript II SK(+)，PCR2.1等載體：含有若干常用限制性內切酶識別序列；

    (2) pGH，pGE 載體：結構簡單，僅含最常用的酶切位點，系捷瑞公司自主研發（見目錄載體和菌株部分介紹）；

    (3) pTG19-T 載體：適用于T/A克??；另外，本公司還有近300種商業表達載體（如pET系列，pPIC系列）可供基因合成后克隆選擇；若有特殊要求，需換到一些特殊載體或改造過的載體，為方便后續實驗的及時進行，請提供載體及相關的載體信息。

Q7. 捷瑞公司的合成時間如何?

    1500bp以內的常規基因，承諾15個工作日內發貨。

Q8. 為什么基因合成的費用比引物合成高的多?

    基因合成包括一個完整的流程：序列分析、優化、引物設計與合成、引物拼接與PCR擴增，PCR產物的T/A克隆，測序篩選，點突變修復、發貨準備等一整套服務，而引物合成只是基因合成工作中的一小部分。如同買一輛汽車與買一堆鐵塊和橡膠是一個道理。

Q9. 基因合成必須要提供基因序列嗎?

    是的。您必須提供AA序列或者DNA序列。我們只根據您提供的序列進行基因合成，可以提供免費密碼子優化，但是不提供基因序列的查詢服務。

Q10. 必須要簽定合同與交納50%預付款嗎?

    是的，為保障雙方權利與信譽，應該這么做。

Q11. 質量如何保證? 時間如何保證?

    所有在捷瑞公司合成的基因，都經過100%測序驗證。捷瑞公司基因部擁有獨立的分子生物學實驗平臺；本公司引物合成部、測序部，分子生物學試劑盒部，是基因合成部的根本保障?；虿恐鞴軗碛惺暌陨蠈I合成基因的工作經驗，基因合成的工作團隊均經過專業、嚴格的培訓，能保證所承接項目順利進行。