引物和探針的實驗要求
    PCR是分子生物學實驗中最常使用的實驗方法。引物和探針的設計是實驗者進行PCR擴增時必須要了解的一個知識點。
1.  由于引物原因導致PCR擴增有非特異性擴增
    引物特異性差是PCR有非特異性擴增的一個主要原因。特別是模板為基因組等復雜模板時，對引物設計有較高要求?？梢酝ㄟ^:
1）提高退火溫度；
2）選擇模板其它區域重新設計引物；
3）如果是做染料法熒光定量PCR的，引物純化方式要為Page，HPLC等純化級別。
2.  PCR擴增后有引物二聚體
    染料法熒光定量PCR對引物設計上要求較高。
1）引物結構上不能有較嚴重的二聚體及發夾結構；
2）PCR體系中引物濃度一般在0.1um-1um，一般為0.2um。如果引物濃度要求更低，可以嘗試在0.05um-0.1um；
3）提高退火溫度。.
3.  熒光定量PCR的引物設計要求
1）引物GC含量盡可能在40%-60%，Tm值最好取60℃左右；
2）避免引物自身或與引物之間形成4個或以上連續堿基配對，同時沒有形成發夾結構；
3）引物長度在20-30bp；
4）目的片段長度一般設計為100-200bp；
5）引物特異性要較高。
4.  Taqman探針的設計要求
1）Tm值最好在65-70℃（MGB探針可以降低Tm值）；
2）探針的5’端應避免堿基G；
3）探針長度最好在20-30bp；
4）探針盡可能的靠近引物位置；
5）保證探針的高度特異性。